采用具有適度疏水性的填料，以含鹽水溶液作流動相，借助于溶質與固定相間的 疏水相互作用實現分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同，所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質的分離與純化。

　　丁基疏水色譜柱的注意事項：

　　1、當使用2.1mm內徑色譜柱時，建議優化系統以減少譜帶展寬。

　　2、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。

　　3、使用新鮮潔凈的水與乙腈，沖洗系統，確保系統干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。

　　4、將入口端連接到系統上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。

　　5、重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規分析時所使用的流速。

　　6、參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩定。

　　由于和藥物安全以及生產成本息息相關，對于重組蛋白藥物（包括單抗）的非均一性分析變得越來越被重視。TSKgel Butyl-NPR（4.6 mm ID X 3.5 cm）已經上市超過20年了，它以對蛋白的高速、高分辨率的分離性能為廣大客戶提供了幫助。新上市的Butyl-NPR（4.6 mm ID X 10 cm）色譜柱具有更高的分辨率，可以滿足生物制藥的研究人員對于HPLC色譜柱的分辨率和分離選擇性的更高要求。